تنقية و توصيف أنزيم ألفا-اميليز الثابت حراريا من العزلة المحلية الطافرة Bacillus licheniformis HM4

الملخص AR

نقي أنزيم الفا – أميليز من العزلة المحلية الطافرة بالعامل الكيميائي ( النايتروزوكوانيدين) B .

licheniformis HM4 بخطوات عدة تضمنت التركيز بالترسيب بكبريتات الأمونيوم بنسبة إشباع 80% و تقنية كروموتوغرافيا التبادل الأيوني باستعمال المبادل DEAE – cellulose، ثم الترشيح الهلامي على عمود Sephacryl S – 300.

كان عدد مرات التنقية للمتناظرات الأنزيمية الثلاثة (c1, b1, a2) هي 18.04 ، 17.5، 16.6 بحصيلة أنزيمية مقدارها 18.7، 18.41، 23.29%.

بينت نتائج توصيف المتناظرات الأنزيمية الثلاثة(c1, b1, a2) أن الرقم الهيدروجيني الأمثل لفعالية المتناظرات الأنزيمية الثلاثة هي 7، 8، 8، على التوالي، و تراوح الرقم الهيدروجيني الأمثل لثبات المتناظرات الأنزيمية الثلاثة هي 6.5، 5، 9.5 على التوالي.

بلغت درجة الحرارة المثلى لفعالية المتناظرات الأنزيمية هي 60، 70، 90 مْ على التوالي.

حددت قيمة التنشيط لتحويل المادة الأساس إلى ناتج للمتناظرات الأنزيمية الثلاثة بـ 8008، 2542، 1373 سعره / مول و احتفظت بكامل فعاليتها عند حضنها مدة 15 دقيقة في درجة حرارة 50 مْ و فقدت حوالي 40% من فعاليتها بدرجة حرارة أعلى من 80 مْ.

أوضحت نتائج تأثير بعض المركبات في فعالية الأنزيم عدم تأثره بوجود كلوريد المغنيسيوم و المنغنيز الإ بنسبة قليلة عند التركيز 5 و 10 ملي مولر، في حين أظهر كل من كلوريد الزئبق و الفضة تأثيرا تثبيطيا واضحا في فعالية المتناظرات الأنزيمية الثلاثة إذ لم تتجاوز الفعالية المتبقية لها لأيونات الزئبق و الفضة عن 46.5% و 56% على التوالي، و أظهرت كلوريدات الكالسيوم تأثيرا حفزيا واضحا للفعالية للمتناظرات الأنزيمية الثلاثة و التي تبين أنها من نوع الأنزيمات المعدنية Metalloenzymes.

و احتفظت هذه المتناظرات بفعاليتها تقريبا عند معاملتها بالعامل المختزل2- مركبتوأيثانول عند التراكيز نفسها فضلا عن ذلك فقد احتفظت بفعاليتها تقريبا عند معاملتها بـ 1 و 5 ملي مولر المركب PMSF) phenyl Methyl Sulphoyl Flouride ) مما يدل على عدم انتماء هذه المتناظرات الأنزيمية إلى مجموعة الأميليزات السيرينية.

و اختبرت قابلية المتناظرات الأنزيمية الثلاثة (c1, b1, a2) على تحليل النشأ بواسطة تقنية كروموتوغرافيا الطبقة الرقيقة( Thin Layer Chromotography (TLC و أظهرت نواتج تحلل النشأ بفعل المتناظرات الأنزيمية الثلاثة أن الكلوكوز و المالتوز يظهران بوصفهما ناتجي تحلل بعد 30 و 60 دقيقة من زمن التفاعل الأنزيمي.