استخدام تقنية التفاعل التسلسلي للبوليمريز للتحري عن قطعة من جين الجلوبين-بيتا و محاولة أستنسالها

الملخص AR

بنيت مكتبة وراثية بشرية Human genomic library من أجل تعقب جين الجلوبين بيتا Beta globin gene باستعمال قطع حامض نووي DNA بحجم يتراوح بين 21-18 كيلو قاعدة Kb باستعمال البلازميد pBR322 و البكتريا المؤهلة Competent E.

coli HB 101 التي استعملت بحيوية قدرها 10 x 4.5 خلية / مليلتر.

بلغ حجم المكتبة الوراثية البشرية التي تم بناؤها 107 x 4.25 خلية و بكفاءة استنسال عالية بلغت 84.70 %.

كما كانت نسبة المستعمرات البكتيرية ذات البلازميدات الهجينة 0.08 % من عدد البكتريا المؤهلة الحية (10 10 x 4.5) التي بلغت كفاءة التحول فيها 810 x 0.12 خلية107 / 0.2 خلية وهو أكبر من حجم المكتبة الوراثية المفترض أنشاؤها 105 x 1.4 خلية اللازمة لوجود جين الجلوبين بيتا باحتمالية 95 %.

استخلص أكثر من 120 عينة حامض نووي بلازميدي هجين من المكتبة الوراثية من أجل تعقب جين الجلوبين بيتا باستعمال تقنية تفاعل سلسلة البوليميريز Polymerase chain reaction-PCR و استعمال بادئتين للموقعين IVSI-6N و Cod-39N.

بينت نتائج هذا التفاعل بوجود نتيجة إيجابية مع الموقع Cod-39N في عينة واحدة من عينات البلازميدات الهجينة فيما فشلت جميع العينات الأ خرى في الحصول على نتيجة مع الموقع IVSI-6N مما يؤكد بأن قطعة الحامض النووي البشرية التي تم فيها تعقب الموقع Cod-39N لا تحتوي على جين الجلوبين بيتا ك املا.

كما لا يعرف بالضبط فيما أذا كانت هذه القطعة تحتوي على مواقع أخرى لنفس الجين مما يتطلب أس تعمال أعداد أخرى من المواقع للتأكد من ذلك.