التنقية الجزئية لأنزيم الكلوتاميت ديهايدروجينيز من كالس سيقان نبات الحبة السوداء (L. Nigella sativa)‎ بوجود 2,4-D أو PDA

الملخص AR

شملت الدراسة استحداث و نمو كالس سيقان نبات الحبة السوداء على وسط موراشيج و سكوك (ms) الصلب المضاف إليه 6-1010 10 مولار من حامض 2، 4- ثنائي كلوروفينوكسي حامض الخليك (2,4-D) أو 6-1010 10 مولار من حامض بنتاداينويك (pda) و دراسة عزل و قياس فعالية أنزيم كلوتاميت ديهايدروجينيز (GDH) من الكالس المستحدث على الوسط الغذائي فضلا عن مقارنة فعاليته بوجود المنظم القياسي 2,4-D أو PDA المحضر مختبريا.

1010 و بلغ الوزن الطري للكالس النامي على وسط MS المعلب المضاف إليه 2,4-D بمقدار5.72 غراما مقارنة بمقدار 2.81 غراما بوجود PDA بعد 45 يوما من الزراعة.

و بلغت الكمية الكافة للبروتين من الكالس النامي على الوسط المضاف إليه 2,4-D أو PDA مقدار 1.050 و 1.116 ملي غرام / غرام وزن طري على التوالي.

و وجد أن الفعالية النوعية لأنزيم GDH ازدادت بعد كل خطوة من خطوات التنقية و بلغ عدد مرات التنقية 23 مرة و كذلك بعد تحديد الظروف المثالية لفعاليته.

و تطلب ذلك استخدام المحلول المنظم HCl-Tris بتركيز 100 ملي مولار و بدالة حامضية 8.6 و 30 مايكرومولار من حامض الكلوتاميك و مايكرومولار واحد من نيكوتين أميد أدنين ثنائي النيوكليوتيد (NAD) و 20 مايكروغرام من الأنزيم و بدرجة حرارة 35 °م.

و بلغت قيمة ثابت ميكيلس- منتن (Km) للكلوتاميت مقدار 27 مايكرومولار باستخدام رسم لاينويفر-بيرك.

و أشارت النتائج إلى أن الفعالية النوعية لأنزيم GDH المستخلص من كالس نبات الحبة السوداء النامي على الوسط الغذائي المضاف إليه 2,4-D أو PDA بلغت مقدار 21.3 و 22.3 مايكرومولار / دقيقة / ملي غرام بروتين على التوالي و بالظروف المثالية.

و وجد كذلك أن قيمة الوزن الجزيئي التقريبي باستخدام الترشيح الهلامي مقدار 302000 دالتون.

و اعتمادا على نتائج هذه الدراسة يمكن القول إن مركب PDA يمكن أن يستخدم بدلا عن 2,4-D في تقانة زراعة الأنسجة النباتية للحبة السوداء و إنه عمل بصورة مشابهة إلى حد ما لعمل الأوكسينات القياسية المصنعة.

و يمكن أن يعد على أنه أوكسين محضر مختبريا و يمكن استخدامه في أنظمة زراعة الأنسجة النباتية للعديد من النباتات.