إنتاج السليوليزات من Aspergillus SP. المعزول محليا و دراسة بعض خصائصها و استعمالاتها التطبيقية : 3-تنقية أنزيمي السليوليز و السلوباييز من العزلة (A18)‎

الملخص AR

أجريت تنقية الإنزيم الخام المحللة للسليلوز المنتجة من Aspergillus sp.

(A18) بطريقة تخمرات الحالة الصلبة إلى حد التجانس باستخدام الترسيب بكبريتات الأمونيوم بنسبة إشباع 40% ثم الترشيح الهلامي (Sephadex G-200) بأبعاد العمود (1.5 x 60 سم).

تم الاسترداد بمحلول دارئ الفوسفات (0.2 مولاري) و بأس هيدروجيني 8.0 و الحاوي على كلوريد الصوديوم (0.05 مولاري).

أظهرت النتائج وجود قمتين بروتينيتين A و B تحتوي كل منهما على فعالية إنزيم السليوليز و السلوباييز باستخدام مادتي التفاعل السليلوز و السليبايوز على الترتيب.

انتخبت القمة B لكونها تمثل الحصيلة الأكبر و الحاوية على إنزيمي السليوليز BCI و السلوباييز BCb.

بعد ذلك أجريت عملية الديلزة للقمة B مقابل محلول دارئ الفوسفات (0.01 مولاري) لتهيئة العينة للتنقية بواسطة كروماتوكرافيا التبادل الأيوني باستخدام المبادل الأيوني DEAE – Sephadex A50 بأبعاد العمود (2.2 x 8 سم).

أمكن الحصول على صورتين من إنزيم السلوباييز أحدهما غير مرتبط BCb1 و الثاني مرتبط BCb2 و صورة واحدة لإنزيم السليوليز المرتبط BCI.

تم انتخاب إنزيم السلوباييز الثاني المرتبط لدراسته فضلا عن إنزيم السليوليز.

بلغ عدد مرات التنقية للسليوليز (BCI) 41.24 و السلوباييز (BCb2) 32.83 و بحصيلة أنزيمية بلغت 65.25% و 35.09% على الترتيب و بفعالية نوعية 129.5 وحدة / ملغم و 157.59 وحدة / ملغم على الترتيب.

نستنتج أن السيلوليزات هي عبارة عن نظام إنزيمي يحتوي على مجموعة من الإنزيمات المتداخلة قد تكون متساوية في وزنها الجزيئي و لكنها تختلف في صافي شحنتها و يمكن الفصل بينها باستخدام التقنيات المشار إليها، و الحصول على قمم منفصلة (إنزيمات منفصلة) و إمكانية دراسة كل منها على حدة لمعرفة نوعيتها و طريقة تحليلها للسليلوز فيما إذا كانت من النوع الخارجي Exoglucanase أو الداخلي Endoglucanase.