Purification of murine heat shock protein 90-beta (84 KDA) from mice tumor cell line
Other Title(s)
تنقية بروتين الصدمة الحرارية 90 نمط بيتا ( 84 كيلودالتون) الفأري من أحد خطوط خلايا سرطان الفئران
Joint Authors
al-Jumayli, Isam Fadil A.
al-Rikabi, Nahi Yusuf Yasin
Tawfiq, Amir Talib
Source
Iraqi Journal of Biotechnology
Issue
Vol. 9, Issue 2 (30 Jun. 2010), pp.124-136, 13 p.
Publisher
University of Baghdad Genetic Engineering and Biotechnology for Postgraduate Studies
Publication Date
2010-06-30
Country of Publication
Iraq
No. of Pages
13
Main Subjects
Topics
Abstract AR
جرى تنقية بروتين الصدمة الحراري 90 نمط بيتا من سايتوبلازم خط خلايا AMN3 (خط خلايا سرطان الغدة اللبنية الفأري المستحدث محليا).
لا يوجد لهذا البروتين اختبار فحص الفعالية المعتمد بـشكل نمطـي فـي تنقيـة البروتينات لذا أستعمل وزنه الجزيئي كأحد الأدلة على وجوده خلال مختلـف مراحـل التنقيـة.
أظهـر الترحيـل الكهربائي باستعمال الأكرل أمايد المتعدد بوجود المادة الماسخة (SDS) لبروتين ساتوبلازم الخلايا وجـود حـزم بروتينية تراوح وزنها الجزيئي بين 23.4 و85.1 كيلودالتن.
رسبت بروتينات السايتوبلازم بوساطة ملح كبريتات الأمونيوم بنسبة إشباع 70 % وأظهر أنه يحتوي حزم بروتينيـة تـراوح وزنهـا الجزيئـي بـين 31.6 و 93.3 كيلودالتون.
أظهرت نتائج خطوة التبادل الآيوني باستعمال المبادل الآيوني ثنائي أثيل أمينوأثيل سليلوز –(DEAE Cellulose) للبروتينات المترسبة بكبريتات الأمونيوم وجود قمة واحدة أستردت بتدرج ملحي تراوح بـين 0.5– 0.7 مولرمن كلوريد الصوديوم و احتوت أربعة حزم بروتينية تراوح الوزن الجزيئـي لهـا بـين 17.3 و 85.1 كيلودالتون.
جرت عملية الترشيح الهلامي باستعمال هلام Sephacryl 6B للقمة المستردة من خطـوة التبـادل الآيوني وجرى استرداد عدة قمم من العمود وانتخبت قمة واحدة تمثل وزن جزيئي قريب مـن الـوزن الجزيئـي لبروتين الصدمة الحرارية 90 (84 كيلودالتون) هي قمة بوزن 87 كيلودالتون.
أعيدت خطوة الترشيح الهلامـي للقمة المنتخبة من الخطوة السابقة وأستخدم هذه المرة هـلام Sephacryl S-200.
أكـدت خطـوة الترشـيح الهلامي الثانية وجود قمة بروتينية واحدة منفردة في الأجزاء التي تم جمعها من خطوة الترشيح الهلامي الأولـى، وأن تلك القمة تمتلك وزن جزيئي 83.176 كيلودالتون.
جرى التأكد من نقاوة و وزن تلك القمة بالترحيل الكهربائي على هلام الاكريل أمايد المتعدد وبوجود المواد الماسخة للبروتين (SDS) .
تم التحقق من هويـة تلـك الجزيئـة البروتينية على إنها Hsp90β الفأري باستعمال فحص التثبيت المناعي بالترحيل الكهربائي على هـلام الأكـاروز1% و بتوظيف عدة تشخيص ذات أضداد قياسية وحيدة النسيلة monoclonal antibody متخصصة للارتباط مع Hsp90β الفأري.
Abstract EN
-Murine heat shock protein 90 beta isotype (84 kDa) was purified from the cytoplasm of AMN3 cells (locally established mice mammary adenocarcenoma cell line).
This protein does not have an in vitro activity assay, to confirm its presence during purification, detection of protein with molecular weight equal or near 84 kDa was followed in each purification step.
The cell cytoplasm fraction of AMN3 cells contained proteins of molecular weight (MW) ranged from 23.
4 to 85.
1 kDa as determined with SDS-PAGE analysis.
The precipitate of 70% ammonium sulfate saturation of cytoplasm fraction exhibited protein bands with molecular weight ranged from 31.
6 to 93.3 kDa.
Ion exchange chromatography with DEAE-Cellulose column for the ammonium sulfate precipitated cytoplasm proteins produced one prominent peak, eluted between 0.
5 and 0.
7 M NaCl.
This peak contained four proteins with MW ranged from 17.
3 to 85.
1 kDa.
Gel filtration through Sepharose 6B column for the peak eluted from DEAE-Cellulose column was conducted, different peaks were resulted.
A peak with estimated molecular weight of 87 kDa was selected.
Second round of gel filtration through Sephacryl S-200 was conducted for the 87 kDa selected fractions eluted from the previous gel filtration step.
The presence of one peak was emphasized and its estimated MW was 83.
176 kDa.
The molecular weight and purity of this protein were checked again with SDS-PAGE.
The identity of the purified protein as Hsp90β was confirmed with immunofixation assay by gel electrophoresis on 1% agarose using standard monoclonal antibody specific for murine Hsp90β.
American Psychological Association (APA)
Tawfiq, Amir Talib& al-Jumayli, Isam Fadil A.& al-Rikabi, Nahi Yusuf Yasin. 2010. Purification of murine heat shock protein 90-beta (84 KDA) from mice tumor cell line. Iraqi Journal of Biotechnology،Vol. 9, no. 2, pp.124-136.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-382923
Modern Language Association (MLA)
Tawfiq, Amir Talib…[et al.]. Purification of murine heat shock protein 90-beta (84 KDA) from mice tumor cell line. Iraqi Journal of Biotechnology Vol. 9, no. 2 (2010), pp.124-136.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-382923
American Medical Association (AMA)
Tawfiq, Amir Talib& al-Jumayli, Isam Fadil A.& al-Rikabi, Nahi Yusuf Yasin. Purification of murine heat shock protein 90-beta (84 KDA) from mice tumor cell line. Iraqi Journal of Biotechnology. 2010. Vol. 9, no. 2, pp.124-136.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-382923
Data Type
Journal Articles
Language
English
Notes
Includes bibliographical references : p. 135-136
Record ID
BIM-382923
