The frequency of JAK2V617F and JAK2 exon 12 mutations among patients suspected to have polycythemia Vera in west bank-Palestine

Other Title(s)

نسبة وجود طفرات JAK2V617F و 12 exon JAK2 بين المرضى المشتبه في إصابتهم بكثرة الحمر الحقيقية في الضفة الغربية-فلسطين

Dissertant

Abu Lafah, Nuzhah Abd Allah

Thesis advisor

Farraj, Muhammad
al-Zahir, Yaqub

University

Birzeit University

Faculty

Faculty of Science

Department

Department Nutrition and Dietetics

University Country

Palestine (West Bank)

Degree

Master

Degree Date

2021

Arabic Abstract

مقدمة : تعرف ال (Polycythemia vera PV) بسرطان الدم الذي يتميز بالإفراط في إنتاج خلايا الدم الحمراء مع إمكانية تحوله إلى سرطان دم حبيث.

و بالتالي، فإن ازدياد فهم الوراثة الجزيئية و البيولوجيا الحلوية لهذا الاضطراب يحسن من التشخيص و التحكم في سير هذا المرض.

أظهرت العديد من الدراسات الوراثية أن JAK206177 هو الطفرة الأكثر انتشارا لهذا المرض و تقدر بمعدل 95% ، و طفرة 12 JAK2 exon موجودة بنسبة 3% لدى الذين لا يحملون طفرة JAK 2V617F .

التي تؤثر على نشاط ادريم التيروسين كايدير و المرتبط بزيادة حساسية الإريثروبويتين لإنتاج كريات الدم الحمراء.

الأهداف : الهدف الأساسي من هذه الدراسة هو تحديد سبة طفرات JAK2617 و 12 JAK2 exon بين المرضى الفلسطينيين التي تشير الدلائل أنهم قد يعانون من ارتفاع كريات الدم الحمراء الحقيقي باستخدام عدة تقديات جزيئية مختلفة.

المواد و الطرق : تم تصميم هذه الدراسة للمقارنة بين من يحملون الطفرات المذكورة من المرضى الفلسطينيين الذين لديهم ميزات ارتفاع كريات الدم الحمراء الحقيقي و مجموعة تحكم لا يوجد لديها ميرات ارتفاع كريات الدم الحمراء الحقيقي.

تم اشتراك 129 فرداً في هذه الدراسة و تم توزيعهم على ثلاث مجموعات على النحو التالي، مرضى ارتفاع كريات الدم الحمراء الذين لديهم مستوى هيمو علوبين أكثر من 18.5 g/dl للرجال و أكثر من 16.5 g/dL للنساء، و يتألف من 52 (40.3) من الأفراد ؛ منهم 4 (7.7%) من الإناث و 48 (92.3) من الذكور.

المجموعة الضابطة التي تكون من 46 (35.7%) من الأفراد الأصحاء الذين لديهم مستوى هيمو علوبين أقل من 16.5 g/dL للرجال و أقل من 16.0 g/dL للنساء ؛ منهم 4 (8.7%) من الإدات و 42 (91.3%) من الذكور.

و تتكون المجموعة المرضى الثانية 31 (224) من الذكور الذين لديهم مستوى هيموغلوبين بين 16.6 g/dl18.5 g/dL.

تراوحت أعمار الأفراد من جميع الفئات ما بين 18 - 83 سنة، و كان متوسط العمر 32 سنة.

تم جمع عينات الدم من المشاركين و اختبارها لمستوى تعداد الدم الكامل و هرمون الإرثروبويتين, كما تم عزل الحمض النووى لإجراء المزيد من التحليل الجزيئي للكشف عن وجود الطفرات.

الطرق الجزيئية التي استخدمت لهذا العرض تشمل : نظام طهرة التضخيم الحراري - تفاعل البلمرة المتسلسل, و تفاعل البلمرة المتسلسل - تقييد طول القطعة تعدد الأشكال, و منحنى الذوبان عالي الدقة.

تم فصل منتجات تفاعل البلمرة المتسلسل على %2 أجارور جل و صبعها باستخدام إينيديوم بروماید و تقييمها.

النتائج باستخدام عدة طرق جزيئية نظام طهرة التضحيم الحراري - تفاعل البلمرة المتسلسل و تفاعل البلمرة المتسلسل تقييد طول القطعة تعدد الأشكال ؛ تم العثور على JAK2617F بنسبة 69.2 (52/36) و 21.7% (46/10) و 51.6 (31/16) في مجموعة المرضى 1 ومجموعة التحكم ومجموعة المرضى 2 على التوالي، وهي قريبة تقريبا من أبحاث الدول المجاورة و الأجنبية.

بينما لم يتم الكشف عن طفرات 12 JAK2 exon في أي فرد.

تم العثور على ارتباط دى دلالة إحصائية بين وجود JAK2V617F وتطوير اضطراب ارتفاع كريات الدم الحمراء الحقيقي بين مجموعات الدراسة، 2.22 X2= ، مع قيمة0.001 >p الخلاصة : هذه الدراسة هي الأولى في الصفة العربية، فلسطين و تهدف إلى تقييم مرضى ارتفاع كريات الدم الحمراء الحقيقي.

وفقا لملاحظتنا بشأن وجود طفرات JAK2V617F بين السكان الفلسطينين.

قد يلزم أحد ما يلي في الاعتبار : وجود JAK2V617F في عالبية و ليس كل مجموعات المرضى ؛ ربما يقترحون وجود طفرة أخرى في اكتساب الوظيفة تساهم في المرض بخلاف تلك المحددة في هذه الدراسة و بالتالي، هناك حاجة إلى مزيد من التحقيقات و الأبحاث أدى التعرف على طفرة JAK2V617F في الأشخاص الأصحاء إلى زيادة احتمالية وجود الطفرة قبل طهور المرض، و يجب تأكيد ذلك من خلال الملاحظة الكافية للأشخاص الأصحاء الذين يحملون الطفرة.

علاوة على ذلك، فإن الاستقرار الجيني القائم على إصلاح الحمض النووى فعال في الخلايا الجذعية المكونة للدم الطبيعي، و لكنه ينخفض في الخلايا المتمايزة، مما يجعلها عرضة للطفرات، بما في ذلك JAK2V617F.

قد تسهم النتائج في زيادة كبيرة لفهم هذا المرض و إمكانية تشخيصه بدقه و ينعكس ذلك في تعزيز النتائج القدرة العلاجية و تقليل نسبة خطر تحوله إلى سرطان الدم - اللوكيميا.

English Abstract

INTRODUCTION: Polycythemia Vera (PV) is a myeloproliferative disorder, characterized by excessive overproduction of normal erythrocytes.

It could be transformed into aggressive leukemia.

Thus, understanding the molecular genetics and cellular biology of this disorder should improve the diagnosis and management of PV.

Several genetic studies have shown that JAK2V617F is the most common mutation associated with PV features (95%), other mutations of JAK2 exon 12 are present in JAK2V617F-negative PV (4%).

Both affect the tyrosine kinase activity and are associated with the erythropoietin-hypersensitive expansion of erythroid progenitors.

The most common mutations detected in JAK2 exon 12 are F537-K539delinsL, and K539L.

OBJECTIVE: to determine the frequencies of JAK2V617, JAK2 exon 12 mutations (F537-K539delinsL, and K539L) among Palestinian patients suspected to have polycythemia Vera, using different molecular techniques.

MATERIALS AND METHODS: This case-control study was designed to determine the presence of mutations among Palestinian patients with PV features and control group.

A total of 129 individuals were enrolled in this study; PV (patients group 1) who have Hb level >18.5g/dL for men and >16.5g/dL for women, 52 patients (40.3%); 4 (7.7%) females and 48 (92.3%) males.

The control group consisted of 46 (35.7%) healthy individuals who have Hb level <16.5 g/dL for men and Hb < 16.0 g/dL for women; of them 4 (8.7%) were females and 42 (91.3%) were males.

The (patients group 2), consisted of 31 (24%) males with Hb level between 16.6 g/dL and 18.5 g/dL but doesn’t meet the 2016 WHO criteria.

The average age of study subjects ranged between 18 - 83 years, with a median of 32 years.

Samples were tested for CBC and EPO level.

The presence of JAK2V617F mutation was tested using amplification-refractory mutation system (ARMS) PCR, and restriction fragment length polymorphism (RFLP).

While the presence of JAK2 exon 12 mutations were tested using ARMS-PCR and high resolution melting curve (HRM).

Results: the rate of JAK2V617F in the sample tested was 69.2% (36/52), 21.7% (10/46), and 51.6% (16/31) in patients group 1, controls group, and patients group 2 respectively.

These results are approximately similar to those published in neighboring and foreign countries.

While JAK2 exon 12 mutations were detected as wild-type in all specimens 100%.

All Statistically significant association was found between the presence of JAK2V617F and developing the PV disorder among study groups, X2 = 22.2, with p-value <0.001 .

CONCLUSION: This study is the first in West-Bank, Palestine intended for the assessment of PV patients.

According to our results regarding the presence of JAK2V617F mutation among Palestinian population.

The following may need to be taken into consideration: • presence of JAK2V617F in majority but not all of patients groups; probably suggest the presence of another gain-of-function mutation contributing to the disease other than those identified in this study.

Thus, more investigations and research are required.

• Identifying the JAK2V617F mutation in healthy people increased the possibility that the mutation is harbored before the onset of the disease, and this must be confirmed by adequate evaluation of healthy people carrying the mutation.

However, the burden of mutated alleles should be identified to determine a cut-off value that can be helpful in PV diagnosis.

Furthermore, genetic stability based on DNA repair is effective in normal hematopoietic stem cells, but decreases in differentiating cells, making them susceptible to mutations, including JAK2V617F .

However, epigenetic modification may repress the effects of JAK2V617F in healthy individuals due to express or silence important gene, thus preventing PV features.

Our understanding of the molecular pathogenesis of PV is very important for the classification, diagnosis, and choice of the best treatment methods that have been proven to alter the natural history of this myeloid neoplasm.

Main Subjects

Biology

No. of Pages

83

Table of Contents

• APA
• MLA
• AMA

Language

English

Data Type

Arab Theses

Record ID

BIM-1412807