تنقية و توصيف أنزيم الكلوكو أميليز المنتج من عزلة محلية لعفن aspergillusniger

Other Title(s)

Purification, characterization of glucoamylasewhich produced by a local isolate of aspergillusniger

Dissertant

ندى فوزي عبد الكريم

Thesis advisor

غضبان، آمال كاظم

University

University of Basrah

Faculty

Agriculture College

Department

Food Processing Technology

University Country

Iraq

Degree

Master

Degree Date

2011

Arabic Abstract

عزلت 60 عزلة محلية من الأعفان من مصادر مختلفة من التربة و الحنطة و الخبز و الذرة البيضاء و الذرة الصفراء و البطاطا ة الهواءو أجريت لها عمليات التنقية و التشخيص و تبين أنها تضم 7 عزلات لعفن Aspergillus flavus و Aspergillus 6 fumigatus و Aspergillus niger 8 و Aspergillus terreus 4 و solani 5 Fusarium و Fusarium sp.5 و Mucor sp.6 و Rhizopus sp.7 و Penicillium sp.4 و Penicillum brevicompactum 2 و Alterrnaria sp.4و Trichoderma sp.2 بعدها اختبرت قابلية العزلات على إنتاج الافلاتوكسين إذ استبعدت العزلات المنجة للأفلاتوكسين و هي عزلات العفن Aspergillus flavus و Aspergillus terreus، ثم أجريت الغربلة (الأولية و الثانوية) لانتقاء العزلة الأكفأ انتاجا لأنزيم الكلوكواميليز، و هي العزلة A لعفن Aspergillus niger التي تم عزلها من الخبز.

أظهرت النتائج أن إنتاج الأأنزيم بتقنية تخمرات الحالة الصلبةstate fermentation Solid كان أفضل مقارنة بإنتاجه بتقنية المزارع المغمورة .submerged culture درست الظروف المثلى لإنتاج أنزيم الكلوكواميليز من العزلة المحلية A1 لعفن Aspergillus niger و وجد أن أفضل وسط غذائي لها مكون من الرز المرطب بمحلول ملحي يحتوي على العناصر المدنية الآتية MgSO4.7H2O و (NH4)2SO4 و FeSO4.7H2O و K2HPO4 و KH2PO4، و كانت نسبة الترطيب 2 : 1 (وزن : حجم)، و إن الرقم الهيدروجيني الابتدائي الأمثل 5، و أفضل محلول استخلاص هو الماء الملقر، و حجم لقاح 106 X 2 بوغ / غم، و الحضن عند 30 م لمدة 5 أيام.

نقي الأنزيم بعدة خطوات تضمنت التركيز بكبتيريا الأموننيوم بنسبة تشبع (40-80 %) ثم كروموتوغرافيا التبادل الأيوني باستعمال المبادل DEAE Sephadex A-50 إذ أظهرت قمتان لها فعالية أنزيمية كانت الأولى في مرحلة الغسل و الثانية في مرحلة الاسترداد و كانت الفعالية النوعية لهما 12225.833 و 983.78 وحدة / مغلم على التوالي، و اختيرت القمة الأولى لامتلاكها أعلى فاعلية للمرحلة الأخيرة من التنقية و هي كروموتوغرافيا الترشيح الهلامي باستعمال G-100 Sephadex إذ أظهرت قمة واحدة و بفاعلية نوعية مقدارها 21083 وحدة / ملغم و عدد التنقية 22.47 مرة و بحصيلة أزيمية مقدارها 20.98 %، ثم اختيرت نقاوة الأنزيم باستعمال تقنية الترحيل الكهربائي في هلام متعددة الأكريل أمايد و وجد أن الأنزيم نقي تماما من خلال إظهاره حزمة واحدة، ثم درست صفات الأنزيم المنقى منها : 1- الوزن الجزئي للأنزيم بلغ 79 كليو دالتون باستعمال تقنية الترحيل الكهربائي في هلام متعدد الأكريل أمايد بوجود .SDS 2- الرقم الهيدؤروجيني الأمثل و درجة الحرارة المثلى لفعالي ة الأنزيم بلغت 5 و 60 م على التوالي.

3- الرقم الهيدروجيني الأمثل تراوح بين (5-7) و درجة الثبات الحراري للأنزيم تراوحت بين (20-60) م.

4- تأثير المنشطات و المثبطات في فاعلية الأنزيم، إذ لوحظ أن أيونات الكالسيوم و النحاس و المنغنيز لها دور منشط في فعالية الأنزيم، بينما انخفضت الفعالية الأنزيمية و بنسب مختلفة عند إضافة البوتاسيوم و المغنيسيوم في حين لم تؤثر إضافة الصوديوم في فعالية الأنزيم، كما لوحظ انخفاض الفعالية عند إضاقة اليوريا و SDS مع زيادة التركيز إما مركب EDTA فلم يكن له تأثير في الفعالية الأنويمية.

5- أظهرت الدراسة الثوابت الحركية إن قيم ثابت Km للأنزيم 1.36 % و قيمة 6250 V max مايكرمول / مللتر / دقيقة عند استعمال النشأ الذائب كمادة أساس.

6- بلغت طاقة التنشيط اللازمة لتحويل المادة الاساس النشأ الذائب إلى ناتج 6.31 كيلو سعره / مول، أما طاقة مسخ الأنزيم فكانت 49.39 كيلو سعرة / مول.

Main Subjects

Biology

Topics

• Production
• Enzymes
• Moulds

No. of Pages

149

Table of Contents

• APA
• MLA
• AMA

Language

Arabic

Data Type

Arab Theses

Record ID

BIM-316677