استخلاص و تقنية إنزيم الكلوكوزايزوميريز الخارج خلوي من العزلة المحلية Bacillus sp. BC4 المحبة للقاعدية

Abstract AR

استعملت العزلــة المحلیــة Bacillus sp.

BC4 المحبة للقاعدیــة و المعزولــة مــن التربــة لإنتــاج إنــزیم الكلوكـو ازیزومیریز الخـارج خلـوي باستعمال وسـط الأمـلاح المعدنیـة السـائل ذو الـرقم الهیـدروجیني 10 و المـدعم بوساطة (10 ملیلتـر / لتـر) مسـتخلص الزایلـوز مـن الحلفـا.

اسـتخلص الإنـزیم بالنبـذ المركـزي و نقـي عـن طریـق ترسیبه بكبریتات الأمونیوم بنسب إشـباع مختلفـة (90، 80، 70، 60، 50 %) ثـم كروموتوغرافیـا التبـادل الأيوني بوســاطة عمــود المبــادل DEAE-Sepharose CL-6B.

بینــت النتــائج أن نســبة الإشــباع 80 % بكبریتــات الامونیوم أعطت أفضل تركیز للإنزیم، إذ بلغت الفعالیة النوعیة 2.61 وحدة / ملغم بروتین و بعدد مـرات تنقیـة 8.7 مـــرة و حصـــیلة إنزیمیـــة 78.3 %، أمـــا خطـــوة كروموتوغرافیـــا التبـــادل الأيوني بوســـاطة المبـــادل -DEAE SepharoseCL-6B فقد لوحظ عـدم وجـود فعالیـة إنزیمیـة فـي مرحلـة غسـل العمـود ممـا یـدل علـى أن معظـم فعالیة الإنزیم تقـع فـي الأجـزاء المسـتردة و أن الإنـزیم یحمـل شـحنة سـالبة فـي الظـروف المسـتعملة جعلتـه یـرتبط بالمبادل.

جمعت الأجزاء الفعالـة لمرحلـة الاسترداد وحسـبت الفعالیـة النوعیـة (6.2 وحـدة / ملغـم بـروتین) و الفعالیـة الكلیة للإنزیم و كانت عدد مرات التنقیة لهذه الخطوة 20.6 مرة و بحصیلة إنزیمیة مقدارها 47.5% .