عزل و دراسة إنزيم كاثابسين B من مصل دم الأنسان السليم

Abstract AR

تضمن البحث عزل إنزيم كاثابسين B من مصل دم شخص سليم ظاهريا باستخدام التقنيات الحياتيـة المختلفة، و قد تضمنت خطوات العزل الترسيب بكبريتات الأمونيوم و الفرز الغـشائي و الترشـيح الهلامـي باستخـدام هلام (Sephade x G-100)، و كان الـوزن الجزيئـي التقريبـي للإنزيـم المعـزول بحـدود (24,000 ± 500 Da) باستخدام تقنية الترشيح الهلامي.

و من خلال دراسة الظروف المثلى لقياس فعالية إنزيم كاثابسين B المنقى جزئيا، تبين أن الإنزيم يعمل في ظـروف مثلى باسـتخدام المحلول المـنظم فوسفات الصوديوم بتركيز (100 mmol / L) و الأسN-Benzoyl-DL- الأساس مادة من (1 mmol / L) و تركيز (40˚C) حرارة و درجة (6.0) pH الهيدوجيني BANA) Arginin-β-Naphthylamide)، و بلغت قيمة ثابت ميكيلس-منتن و السرعة القصوى للإنزيم التوالي على (346.20 U / L) و (0.489 mmol / L) برك -لاينويفر رسم باستخدام و أشارت النتائج إلى أن فعالية إنزيم كاثابسين B المنقى جزئياً تزداد باستخدام بعض المركبات الحاوية على مجموعة الثايول، و أن تأثير السستين أكبر من تأثير بيتا – مركبتو إيثانول و يزداد تأثير هذه المركبات بوجود مادة EDTA في محلول التفاعل.

و أخيراً تمت دراسـة تأثير مركبات أيودوأسيتيت و كلوريد الكالسـيوم و كلوريد الزئبق و كبريتات الخارصين و سيانيد البوتاسيوم على فعالية الإنزيم، و قد أظهرت تأثيراً تثبيطياً بنسب متفاوتة لعمل الإنزيم.

و كان التثبيط من النوع غير العكسي عند اسـتخدام كلوريد الزئبق HgCl2 بتركيز(0.01 mmol / L).