استخلاص و تنقية و توصيف و ربط ببسين الأغنام
Other Title(s)
Extraction, purification, characterization and immobilization of sheep pepsin
Joint Authors
اليونس، زينة كاظم عيسى
الطائي، منير عبود جاسم
Source
Issue
Vol. 6, Issue 4 (31 Dec. 2014), pp.202-223, 22 p.
Publisher
University of Kufa Faculty of Agriculture
Publication Date
2014-12-31
Country of Publication
Iraq
No. of Pages
22
Main Subjects
Topics
Abstract AR
. هدفت الدراسة الحالية إلى استخلاص إنزيم الببسين EC : 3.
4.
23.
1 من معدة الأغنام و تنقيته و دراسة بعض صفاته و ربطه, استخلص الإنزيم باستعمال خمسة محاليل استخلاص لغرض تحديد أفضل محلول استخلاص و قد أوضحت نتائج الدراسة أن محلول كلوريد الصوديوم 6% الحاوي على 2% حامض اليوريك هو أفضل محلول استخلاص حيث أعطى أعلى فعالية نوعية للإنزيم و التي بلغت 14.3 وحدة / ملغم.
ركز المحتوى البروتيني للمستخلص الإنزيمي الخام باستخدام كبريتات الأمونيوم بنسبة إشباع تراوحت بين 30 – 70%, ثم أجريت عملية الديلزة باستعمال الماء المقطر, أكملت خطوات تنقية ببسين الأغنام باستخدام عمود كروماتوغرافيا التبادل الأيوني DEAE – Sephadex A – 50 ثم الترشيح الهلامي على عمود Sephadex G – 100 و بلغت عدد مرات التنقية 27.64 مرة و بحصيلة 18.4%.
بينت نتائج الكشف عن نقاوة ببسين الأغنام وجود حزمة بروتينية واحدة للإنزيم عند الترحيل الكهربائي في هلام متعدد الاكريل امايد تحت ظروف غير ماسخة بغياب مادة SDS.
و كان الوزن الجزيئي لببسين الأغنام 33700 دالتون عند تقديره بطريقة الترحيل الكهربائي في هلام الاكريل امايد المتعدد بوجود مادة SDS.
تم ربط ببسين الأغنام النقي بالاكار بتركيز 3%, و بلغت الفعالية المتبقية لببسين الأغنام المرتبط بالاكار 25% بعد استخدامه 7 مرات, و بلغت الفعالية المتبقية لببسين الأغنام المرتبط بالاكار 22% عند خزنه لفترة 60 يوم على درجة حرارة 4 مْ.
وجد ان الرقم الهيدروجيني الأمثل للفعالية التحللية لببسين الأغنام الحر و المرتبط هو2, بينما أعطى الرقم الهيدروجيني 5.8 أعلى فعالية تخثرية لببسين الأغنام الحر و المرتبط و أن الفعالية التخثرية تقل مع ارتفاع الرقم الهيدروجيني من 5.8 إلى 7, و وجد أن الرقم الهيدروجيني الأمثل لثبات ببسين الأغنام الحر هو 2 و أن الإنزيم الحر و المرتبط فقدا فعاليتهما عند الأرقام القاعدية 8 و 9.
كانت درجة الحرارة المثلى للفعالية التحللية لببسين الأغنام الحر 35 مْ و المرتبط 45 مْ, بينما كانت درجة الحرارة المثلى للفعالية التخثرية لببسين الأغنام الحر و المرتبط هي 35 مْ.
و كانت درجة الحرارة المثلى لثبات ببسين الأغنام الحر و المرتبط تتراوح بين 15 – 35 مْ و أن ببسين الأغنام النقي الحر و المرتبط فقد فعاليته بالكامل عند 75 مْ و 85 مْ على التوالي.
بلغت طاقة التنشيط لفعالية ببسين الأغنام الحر و المرتبط 8.13 كيلو سعرة.
مول -1, 10.79 كيلو سعرة.
مول -1 على التوالي
Abstract EN
The present study aimed to isolate pepsin enzyme Ec : 3.423.1 from sheep stomach and purified it, it's characteristics were studied as free and immobilize under various conditions.
The enzyme was extracted from the stomach using five extraction solutions in order to find out the extraction solution, the study revealed that sodium chloride (6 %) with Boric acid (2 %) solution was the best extraction solution which gave the highest specific activity 14.3 unit / mg.
Protein content for the crude enzyme extracts were concentrated using saturated ammonium sulfate in arrange of 30-70 %, Dialysis was done using distilled water.
Ion exchange chromatography DEAE-Sephadex A-50 was used to complete purification of Sheep pepsin followed by gel filtration using Sephadex G-100, Purification Folds 27.64 time and the yield was 18.4 %.
Electrophoresis process using poly acrylamide gel in the absence of SDS observe the presence of one protein band which indicates the complete purification of Sheep pepsin.
Sheep pepsin molecular weight was 33700 Dalton when it was evaluated using poly acrylamide electrophoresis in the presence of SDS.
The sheep pepsin was immobilized with agar in 3 % concentration.
The remainder enzyme activity for agar Immobilized Sheep pepsin were 25 % after 7 times using and the remainder enzyme activity for agar Immobilize Sheep pepsin were 22 % which stored for 60 days in 4°C.
The optimal pH for proteolytic activity for free and Immobilize Sheep pepsin was 2,On other hand the pH value 5.8 was the highest clotting activity for free and Immobilize Sheep pepsin.
The clotting activity decreased with the increase of pH for 5.8-7.The optimal pH for the stability of free and Immobilize Sheep pepsin are 2.The free and Immobilize enzymes lost their activities at alkaline pH values 8 and 9.
The optimal temperatures of proteolytic activity for free Sheep pepsin was 35 °C and 45°C for its Immobilized form.
The optimal temperature for clotting activity for free and Immobilize Sheep pepsin was 3°C .The optimal temperature for free and Immobilize sheep pepsin stability ranged from 15 to 3°C.
Both free and Immobilize Sheep pepsin lost their activities completely at 75°C, 85°C respectively.
The activation energy for free and immobilize pure Sheep pepsin was 8.13 kcal.
Mol-1 and 10.79 kcal.
Mol-1 respectively.
American Psychological Association (APA)
الطائي، منير عبود جاسم واليونس، زينة كاظم عيسى. 2014. استخلاص و تنقية و توصيف و ربط ببسين الأغنام. مجلة الكوفة للعلوم الزراعية،مج. 6، ع. 4، ص ص. 202-223.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-541832
Modern Language Association (MLA)
الطائي، منير عبود جاسم واليونس، زينة كاظم عيسى. استخلاص و تنقية و توصيف و ربط ببسين الأغنام. مجلة الكوفة للعلوم الزراعية مج. 6، ع. 4 (2014)، ص ص. 202-223.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-541832
American Medical Association (AMA)
الطائي، منير عبود جاسم واليونس، زينة كاظم عيسى. استخلاص و تنقية و توصيف و ربط ببسين الأغنام. مجلة الكوفة للعلوم الزراعية. 2014. مج. 6، ع. 4، ص ص. 202-223.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-541832
Data Type
Journal Articles
Language
Arabic
Notes
يتضمن مراجع ببليوجرافية : ص. 220-223
Record ID
BIM-541832
