تصميم مقايسة غير مباشرة للممتز المناعي المرتبط بالإنزيم لتحري الأضداد المصلية لبروتين فيروس التهاب الكبد البائي المضفر
Other Title(s)
Designing indirect ELISA for screening serum antibodies of hepatitis B splice protein
Joint Authors
Source
Issue
Vol. 7, Issue 1 (30 Oct. 2013), pp.23-33, 11 p.
Publisher
Syrian Clinical Laboratory Association
Publication Date
2013-10-30
Country of Publication
Syria
No. of Pages
11
Main Subjects
Abstract AR
اقترحت بعض الدراسات أضداد بروتين فيروس التهاب الكبد البائي المضفر (HBSP) واصما واعدا للمرض الكبدي المرتبط بفيروس التهاب الكبد البائي.
عمدنا في دراستنا إلى تصميم مقايسة غير مباشرة للممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) بناء على التسلسلات الجينومية العائدة للنمط الجيني D و المستنبطة من ذراري فيروس التهاب الكبد البائي لمصول مرضى سوريين.
جرى اختيار التسلسل الببتيدي المأخوذ من بروتين HBSP وفق مصونيته، و ألفة ارتباطه بمعقد التوافق النسيجي من الصف الأول، و تغطيته 80 % من التغير بين التسلسلات المدروسة.
حيث غطيت الصفائح الصغرية عالية الارتباط بالببتيد الصنعي المختار و حددت الشروط المثلى من الحجب، و تمديد العينة، و شروط الحضن.
و من ثم جرى التحقق من مصدوقية المقايسة باختبار مصول مرضى التهاب كبد بائي مزمن و مصول شاهدة.
تضمنت خطة العمل استخدام ببتيد صنعي مكون من 20 حمضا أمينيا يمتد ما بين الموقعين 62 و 81 من تسلسل البروتين المكون من 111 حمضا أمينيا لتغطية آبار الصفيحة الصغرية للـ ELISA، و مزيج الحجب المكون من البولي فينيل بيروليدون PVP و التوين 20 0.05 % في الدارئة الفسفاتية PBS (pH = 7.4)، و تمديد العينة بنسبة 1 : 100 في محلول الحجب، و الحضن في الدرجة C°37 مدة ساعة بعد إضافة العينة، ثم 30 د.
بالدرجة C°37 بعد إضافة أضداد الغلوبولين البشري المقترن بالإنزيم.
تميزت مقايستنا نصف الكمية هذه بنوعيتها العالية.
و بالتالي فإن تطوير الاختبار الموصوف هنا إلى مقايسة كمية يمكن أن يوفر اختبارا غير باضع يمكن استخدامه في الدراسات المستقبلية للمرض الكبدي.
Abstract EN
Studies have suggested antibodies to hepatitis B splice protein (HBSP) as a promising marker for HBV-associated liver disease.
We designed an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) based on HBV genome sequences obtained from Syrian patients' sera which belonged to genotype D.
HBSP-derived peptide sequence was chosen according to its conservation and MHC I binding affinity; and 80%-variability among studied sequences was covered.
High binding microplates were coated with the chosen synthetic peptide and assay optimization was performed in terms of blocking, dilution and incubation conditions.
The assay was then verified using chronic hepatitis B patients and control sera.
Our concluded protocol involved using a 20 aa-length HBSP-derived peptide spanning aa 62 to 81 of the 111 aa-length protein to coat ELISA microplate wells, blocking with PVP1%, Tween 20 0.05% solution in PBS (pH 7.4), diluting serum sample by 1:100 of blocking solution, and incubating sera for 1 hour at 37°C, and anti-human IgG HRP conjugate for 30 minutes at 37°C.
Our semi-quantitative assay proved to be highly specific.
Consequently, developing the test described herein into a quantitative assay might provide a noninvasive test that can be utilized in the future liver-disease studies.
American Psychological Association (APA)
الحنفي، نور ومنعم، فوزة. 2013. تصميم مقايسة غير مباشرة للممتز المناعي المرتبط بالإنزيم لتحري الأضداد المصلية لبروتين فيروس التهاب الكبد البائي المضفر. مجلة التشخيص المخبري،مج. 7، ع. 1، ص ص. 23-33.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-656078
Modern Language Association (MLA)
الحنفي، نور ومنعم، فوزة. تصميم مقايسة غير مباشرة للممتز المناعي المرتبط بالإنزيم لتحري الأضداد المصلية لبروتين فيروس التهاب الكبد البائي المضفر. مجلة التشخيص المخبري مج. 7، ع. 1 (تشرين الأول 2013)، ص ص. 23-33.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-656078
American Medical Association (AMA)
الحنفي، نور ومنعم، فوزة. تصميم مقايسة غير مباشرة للممتز المناعي المرتبط بالإنزيم لتحري الأضداد المصلية لبروتين فيروس التهاب الكبد البائي المضفر. مجلة التشخيص المخبري. 2013. مج. 7، ع. 1، ص ص. 23-33.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-656078
Data Type
Journal Articles
Language
Arabic
Notes
يتضمن مراجع ببليوجرافية : ص. 32-33
Record ID
BIM-656078
