Study of optimum conditions in detection of ABO genotype by simultaneous PCR-RFLP method

الملخص AR

عزلت المادة الوراثية بطريقتين، الطريقة اليدوية باستخدام عدة العزل و كانت ذات تركيز عالي نسبيا (10-5 ميكروغرام) لكنها بنقاوة دون المثالية (3.3-0.9).

ضبط تركيز المادة الوراثية بما يتلائم طريقة تفاعل التضاعف التسلسلي (PCR).

تم مضاعفة قطعتان من جين ABO، القطعة الأولى في الأكسون 6 تتضمن النيوكليوتيد 261، والقطعة الثانية في الأكسون 7 و المتضمنة الينيوكليوتيد 703 (جين ABO يتكون من 7 أكسونات و 6 انترونات) باستخدام تسلسلات من بادئ البلمرة (Primers) مخصصة لمضاعفة قطعتان تمثل جين ABO بجميع آلياته.

المجموعة الأول يتضمن زوج البوادئ (1،2) التي نتج من مضاعفة القطعة الأولى 200 زوج قاعد و الذي يتضمن النيوكليوتيدات 261 بينما نتج عن المجموعة الثانية من زوج البوادئ (2،3) مضاعفة القطعة 128 زوج قاعدة والمتضمنة النية كليوتيدات 703.

فصلت نواتج PCR على 2% من هلام باستخدام الينوكليوتيدات 261 و 703 لتميز آليات مجاميع الدم A,B,O بواسطة إنزيمات التقييد.

استخدمت نوعين من إنزيمات التقييد الأول Kpnl الذي يحدد الطفرة الوارثية (الحذف) الموجود عند النيوكليوتيد 261 بينما الإنزيم الثاني AluI فيحدد الطفرة الوراثية (الاستبدال) الموجودة في النيوكليوتيد703، تم ترحيل ناتج عملية الهضم بإنزيمات التقييد على 6 % من هلام الاكاروز واطئ الانصهار لمشاهدة جميع القطع الناتجة من عملية الهضم و مقارنتها مع الحامض النووي القياسي السلمي.

أظهرت طريقة التحري الجزيئي RFLP-PCR للتحري عن صنف الدم ABO أن من مجموع 14 نموذج صنف دمهم A كان 13 منهم ذوي طرز وراثية هجينة AO و واحد فقط ذو طرز وراثي متجانس AA، بينما كان 14 نموذج صنفهم B، 13 منهم ذوي طرز وراثية هجينة BO و واحد فقط ذو طرز وراثي متجانس BB.

نموذج واحد فط لكل من صنف الدم A B O حيث كانوا متجانسي الطرز الوراثية، يعتبر صنف A B ذات سيادة مشاركة لأن كلا الإليلين يشفرون لصفاتهم على سطح كرية الدم الحمراء، أما بالنسبة للصنف O فهو ذات آليات متتحية لا تظهر إلا في حالة Homozygous وهي متنحية أمام الآليات A، B.

خلصت الدراسة أن طريقة RFLP-PCR هي سريعة، عملية، قليلة التكلفة و سنهة في قراءة النتائج.

ممكن أن تستغل في الطب العدلي الجنائي، في فحص البنوة و بعض حالات نقل الدم الدوري في مصرف الدم.