Purification ofmurine heat shock protein 90-beta (84 kda)‎ frommice spleen

الملخص AR

تمت تنقية بروتين الصدمة الحرارية 90 نمط بيتا (84 كيلودالتن) من سايتوبلازم خلايا طحال الفئران البيض ضرب BALB/c.

و بسبب عدم وجود فحص فعالية خاص بالكشف عن هذا البروتين فقد اعتمد وزنه الجزئيئ كأحد الأدلة على وجوده مختلف مراحل التقنية.

أظهر الترحيل الكهربائي باستعمال الأكرل أمايد المتعدد بوجود المادة الماسخة للبروتين (SDS) لجزء ساتوبلازم خلايا الطحال وجود بروتينية تراوح وزنها الجزيئي بين 20.9 و 86 كيلودالتن.

أظهرت نتائج خطوة التبادل الأيوني باستعمال المبادل الأيوني ثنائي أنيل امينواثيل سليلوز DEAE-Cellulose)) للبروتينات المترسبة بكبريتات الأمونيوم وجود قمة واحدة استردت بتدرج ملحي تراوح بين 0.5-0.7 موولرمن كلوريد الصوديوم و احتوت أربعة حزم بروتينية تراوح الوزن الجزيئي لها بين 19-83.1 كليودالتون.

جرت عملية الترشيج الهلامي باستعمال هلام Sephacryl 6B للقمة المستردة من خطوة التبادل الأيوني و جرى استرداد عدة قمم من العمود و انتخبت قمة واحدة تمثل وزن جزئي قريب من الوزن الجزيئي لبروتين الصدمة الحرارية 90(84 كليوالتون) هي قمة بوزن 87 كليودالتون.

أعيدت خطوة الترشيح الهلامي للقمة المنتخبة من الخطوة السابقة و استعمل هذه المرة هلام 200Sephacryl S-.

أكدت خطوة الترشيح الهلامي الثانية وجود قمة بروتينية واحدة منفردة في الأجزاء التي تم جمعها من خطوة الترشيح الهلامي الأولى.

و أن تلك القمة تمتلك وزن جزئي 83.176 كيلوداتلون.

جرى التأكد من نقاوة و وزن تلك القمة بالترحيل الكهربائي على هلام الاكريل امايد المتعدد و بوجود المواد الماسخة للبروتين (SDS) و كانت النتيجة أن هناك حزمة بروتينية واحدة ذات وزن 83 كيلو دالتون.

تم التحقق من هوية تلك الجزئية البروتينية على إنها Hsp90β الفأري باستعمال فحص التثبيت المناعي بالترحيل الكهربائي على هلام الأكاروز 1 % و بتوظيف عدة تشخيص ذات أضداد قياسية وحيدة النسيلة (monoclonalantibody)) متخصصة للارتباط مع Hsp90β الفأري.