Construction of pRSET-sFGFP plasmid for fusion-protein expression, purification and detection
المؤلفون المشاركون
al-Himsi, Lamis
Assaad, Jana M.
Quwaydir, Mahmud
al-Uqlah, Suud
Abbadi, Abd al-Qadir A.
المصدر
Jordan Journal of Biological Sciences
العدد
المجلد 5، العدد 4 (31 ديسمبر/كانون الأول 2012)، ص ص. 279-287، 9ص.
الناشر
الجامعة الهاشمية عمادة البحث العلمي و الدراسات العليا
تاريخ النشر
2012-12-31
دولة النشر
الأردن
عدد الصفحات
9
التخصصات الرئيسية
الملخص EN
Green fluorescent protein (GFP) is widely used as an excellent expression tag for fusion proteins, which can improve their expression while preserving their function and native-like structure.
Fusion protein method allows the purification and the detection of a protein of interest even when no specific antibody is available.
This study aimed to design a system for protein expression and detection using a new super-folder derivative of GFP (sGFP) as a fusion partner.
This included the construction of the protein expression plasmid pRSET- sGFP by cloning sGFP gene downstream of the N-terminal 6xHis tag in the T7 promoter-plasmid pRSET.
The soluble expressed sGFP protein (27 kDa) from this plasmid in the cytoplasm of E.
coli was purified using metal affinity chromatography, as shown after SDS-PAGE separation and blue gel staining.
In order to detect sGFP, as single or in fusion proteins, in ELISA and immunoblotting analysis, sGFP-specific polyclonal antibodies were produced in rabbit after immunization with three injections with the pure sGFP prepared in Freund's adjuvant.
Two-step antibody purification, using protein A-Sepharose and sGFP-coupled Sepharose affinity chromatography columns, was performed to obtain highly reactive and pure sGFP-specific IgG.
This system will provide an efficient tool for the expression, purification and detection of many proteins, having problems in solubility and stability, as fusion partners with sGFP.
نمط استشهاد جمعية علماء النفس الأمريكية (APA)
al-Himsi, Lamis& Assaad, Jana M.& Quwaydir, Mahmud& al-Uqlah, Suud& Abbadi, Abd al-Qadir A.. 2012. Construction of pRSET-sFGFP plasmid for fusion-protein expression, purification and detection. Jordan Journal of Biological Sciences،Vol. 5, no. 4, pp.279-287.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-311210
نمط استشهاد الجمعية الأمريكية للغات الحديثة (MLA)
al-Himsi, Lamis…[et al.]. Construction of pRSET-sFGFP plasmid for fusion-protein expression, purification and detection. Jordan Journal of Biological Sciences Vol. 5, no. 4 (Dec. 2012), pp.279-287.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-311210
نمط استشهاد الجمعية الطبية الأمريكية (AMA)
al-Himsi, Lamis& Assaad, Jana M.& Quwaydir, Mahmud& al-Uqlah, Suud& Abbadi, Abd al-Qadir A.. Construction of pRSET-sFGFP plasmid for fusion-protein expression, purification and detection. Jordan Journal of Biological Sciences. 2012. Vol. 5, no. 4, pp.279-287.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-311210
نوع البيانات
مقالات
لغة النص
الإنجليزية
الملاحظات
Includes bibliographical references : p. 285-287
رقم السجل
BIM-311210
قاعدة معامل التأثير والاستشهادات المرجعية العربي "ارسيف Arcif"
أضخم قاعدة بيانات عربية للاستشهادات المرجعية للمجلات العلمية المحكمة الصادرة في العالم العربي
تقوم هذه الخدمة بالتحقق من التشابه أو الانتحال في الأبحاث والمقالات العلمية والأطروحات الجامعية والكتب والأبحاث باللغة العربية، وتحديد درجة التشابه أو أصالة الأعمال البحثية وحماية ملكيتها الفكرية. تعرف اكثر