عزل و دراسة أنزيم السوربيتول ديهيدروجينيز (SDH)‎ من بلازما دم الإنسان

الملخص AR

تضمن البحث عزل و توصيف أنزيم السوربيتول ديهيدروجينيز ( (SDH من بلازما الدم لشخص طبيعي متبرع سليم من فصيلة الدم (B) بعمر (34 سنة) باستخدام التقنيات الحيوية المختلفة.

و قد أظهرت نتائج تقنية الترشيح الهلامي التي أجريت في عمود الفصل الحاوي على الهلام (Sephadex G-100) احتواء محلول الراسب البروتيني الناتج من الترسيب بكبريتات الامونيوم بعد إجراء عملية الديلزة على حزمتين بروتينيتين و تبين امتلاك الحزمة البروتينية الثانية (قمة (ІІ فعالية عالية للأنزيم، إذ بلغت عدد مرات التنقية للحزمة البروتينية الثانية (8 مرات)، فضلا عن ذلك تم تحديد الوزن الجزيئي التقريبي لأنزيم (SDH) المنقى جزئيا (الحزمة البروتينية (ІІ باستخدام تقنية الترشيح الهلامي و كان مقداره ( 38672 دالتون).

ثم حددت بعد ذلك الظروف المثلى لعمل الأنزيم المنقى جزئيا، و أظهرت النتائج أن الأنزيم يعمل في المحلول المنظم عند تركيز 100 μl لثلاثي إيثانول أمين، و أس هيدروجيني قدره ( 7) و درجة حرارة مثلى ( 40 °م) و عند تركيز ( 1.5 مولاري) للفركتوز كمادة أساس.

و باستخدام رسم لاينويفر-بيرك وجد أن السرعة القصوى (V max) التي يعمل بها الأنزيم تساوي ( 0.53 ) مايكرومول / دقيقة، و إن قيمة ثابت ميكيلس- منتن (Km) تساوي 0.92 مولاري.

كذلك أظهرت الدراسة بأن هنالك مركبات كيميائية لها تأثير منشط مثل EDTA, Mg, Zn) أما مركب فلوريد الصوديوم (NaF) فقد أظهرت النتائج بأن تأثيره مثبط و هو من النوع غير التنافسي لفعالية الأنزيم و عند تركيز (3 m mol / L).