![](/images/graphics-bg.png)
Sequences and expression of the active lysostaphin gene from staphylococcus simulans isolated of bovine mastitis and its bactericidal effect on staphylococcus aureus
Other Title(s)
تحديد تسلسل و تعبير جين اللايسوستافين من Staphylococcus simulans المعزولة من التهاب الضرع البقري و دراسة تأثيره على Staphylococcus aureus
Joint Authors
Mahdi, Kawthar Hawwaz
Mustafa, Jalal Yasin
al-Idani, Thair Abd Ali
Source
Iraqi Journal of Biotechnology
Issue
Vol. 11, Issue 2 (31 Dec. 2012), pp.321-339, 19 p.
Publisher
University of Baghdad Genetic Engineering and Biotechnology for Postgraduate Studies
Publication Date
2012-12-31
Country of Publication
Iraq
No. of Pages
19
Main Subjects
Topics
Abstract AR
جمعت 60 عینة حلیب من أبقار مصابة بالتهاب الضرع السریري في محافظة البصرة.
وجد أن 55 عينة بنسبة (% 91.66) أعطت نمو بكتیریا على وسط أكار الدم، و بعد التشخیص المجهري و الكیموحیوي تم تشخیص 46 عزلة (% 81.66) لجراثیم المكورات العنقودیة الموجبة لصبغة كرام، 30 عزلة (% 50) S.
aureus موجبة لاختبار التجلط و 19 عزلة (% 31.66) مكورات عنقودیة سالبة لاختبار التجلط.
حددت منها عزلتان لبكتریا S.
simulans، أعطت واحدة منها فعالیه تثبیطیة لبكتریا S.
aureus.
عزل جین اللایسوستافین الفعال و حدد حجمه البالغ 738 زوج قاعدي، كما تم تحدید تتابعه و كلونته إلى بكتریا E.
coli و دراسة تأثیر البكتریا المتحولة بالجین الفعال على بكتریا S.
aureus.
بعد ذلك تم تحضیر جین لایسوستافین حاوي على مجموعة هستدین طرفیة لغرض العزل و التنقیة باستعمال برایمرات خاصة ثم إستنساله، عزل بروتین اللایسوستافین باستعمال عمود الهس تاك الذي أظهر كفاءة عالیة جدا بالعزل و التنقیة بفترات زمنیة قصیرة، و قد ظهر ذلك جلیا عند ترحیل البروتین على هلام الأكریل أماید، إذ ظهرت حزمة واحدة مقارنة مع البروتین القیاسي من شركة سكما الذي أعطى أكثر من حزمتین عند الترحیل، و بعد ترحیله على هلام الأكریل أماید تم تحدید تركیزه و تتابعه و حجمه الذي بلغ حوالي 27 كیلو دالتون.
تم استعمال البروتین المنقى كمضاد بكتیري لبكتریا S.
aureus و ذلك بدراسة تأثیره القاتل لها خارج النظام الحي فأعطى مقدرة واضحة لقتل بكتریا S.
aureus.
بعد ذلك تم تحدید الجرعة نصف القاتلة للبروتین المنقى (LD50) و ذلك بإصابة 30 فأر، و أشارت النتائج إلى عدم ظهور أي نسبة قتل للفئران مع كل التخافیف المُستعملة دلالة على سلامة الحیوان المحقون بالبروتین المنقى.
كذلك تمت دراسة تأثیر البروتین المعزول على بكتریا S.
aureus في داخل النظام الحي و ذلك بإحداث إصابة تجریبیة موضعیة و ذلك بإحداث التهاب ضرع تجریبي، تمت معالجة الحیوانات المصابة بالبروتین المعزول و المنقى، أوضحت النتائج التأثیر الكبیر للایسوستافین الذي منع أي تأثیر على الحیوان بعد حقنه، كما تم عزل الغدد اللبنیة و عمل تقطیع نسیجي لنسیجها، و أظهر بروتین اللایسوستافین فعالیة ممیزة و واضحة في القضاء على تأثیر بكتریا S.
aureus المتسببة بإحداث الإصابة.
Abstract EN
Sixty milk samples were recovered from cows suffering from clinical mastitis in Basra.
Among these 55 (91.66%) gave good growth in blood agar.
After microscopical and biochemical tests, 49 isolates have been diagnosed as G+ bacteria staphylococci.
Thirty (50%) isolates of S.
aureus are coagulase positive staphylococci (CoPS) and 19 (31.66%) isolates were coagulase negative staphylococci (CoNS).
Among the recovered isolates, two isolates are S.
simulans and only one gave good antimicrobial activity against S.
aureus on the basis of inhibition zone.
The active lysostaphin gene with determined size and sequences are 738 bp was isolated and then cloned to E.
coli.
A lysostaphin gene was prepared with terminal Histidine group in order to isolate and purify lysostaphin protein by used special primers.
His-tag column was chosen for isolation and purification of protein with in short time.
A high fidelity in running, one band of protein in polyacrylamide gel was seen in comparison with standard protein from Sigma which gave more than two bands, after running in polyacrylamide gel, the molecular weight was about 27 KDa.
The antibacterial effect of lysostaphin against S.
aureus was studied in Vitro which gave good inhibition zone on sold media.
The LD50 of lysostaphin was determined and there were no effects of lysostaphin on mice with all concentrations used.
The effect of lysostaphin against S.
aureus in Vivo was studied by inducible infection in mammary glands (mastitis).
The antibacterial activity of lysostaphin showed significant effect.
Finally the histological studies of mammary glands showed the significant activities of lysostaphin to inhibit the growth of S.
aureus.
To eliminate the antibiotics resistant building this study is conducted.
The aims of the study: Isolation and identification of Staphylococcus simulans as a source of lysostaphin producer from mastitis cows.
Cloning the lysostaphin gene, using expression of this gene as bactericidal effect on S.
aureus in plate.
Screening the effect of lysostaphin on induced infected mice (locally) with S.
aureus.
American Psychological Association (APA)
Mustafa, Jalal Yasin& Mahdi, Kawthar Hawwaz& al-Idani, Thair Abd Ali. 2012. Sequences and expression of the active lysostaphin gene from staphylococcus simulans isolated of bovine mastitis and its bactericidal effect on staphylococcus aureus. Iraqi Journal of Biotechnology،Vol. 11, no. 2, pp.321-339.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-322955
Modern Language Association (MLA)
Mahdi, Kawthar Hawwaz…[et al.]. Sequences and expression of the active lysostaphin gene from staphylococcus simulans isolated of bovine mastitis and its bactericidal effect on staphylococcus aureus. Iraqi Journal of Biotechnology Vol. 11, no. 2 (2012), pp.321-339.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-322955
American Medical Association (AMA)
Mustafa, Jalal Yasin& Mahdi, Kawthar Hawwaz& al-Idani, Thair Abd Ali. Sequences and expression of the active lysostaphin gene from staphylococcus simulans isolated of bovine mastitis and its bactericidal effect on staphylococcus aureus. Iraqi Journal of Biotechnology. 2012. Vol. 11, no. 2, pp.321-339.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-322955
Data Type
Journal Articles
Language
English
Notes
Includes bibliographical references : p. 335-339
Record ID
BIM-322955