تنقية و توصيف أنزيم البيتاكالاكتوسايديز المنتج من العزلة المحلية لعفن Aspergillus oryzae بطريقة تخمرات الحالة الصلبة

Abstract AR

عزلت خمسون عزلة محلية لا عفان من التربة و الجبن و القرش و أجريت لها عمليات التقية و الغربلة (الأولية و الثانوية) و كان عفن Aspergillus oryzae هو الأكفأ في إنتاج أنزيم البيتكالاكتوسايديز، تمت تقية الأنزيم الخام باستعمال التركيز بكبريتات الأمونيوم بنسبة تشبع 65 — 80 %) قم التبادل الأيوني باستعمال المبادل الأيوني 50-DEAE-sephadex A و الترشيح الهلامي باستعمال 100-Sephadex G بعدد مرات تنقية 9.70 مرة و بحصيلة أنزيمية بلغت 25.88 % على التوالي، كما وجد أن الأنزيم نقي تماما من خلال إظهاره حزمة واحدة، درست صفات الأنزيم المنقى فكان الرقم الهيدروجيني الأمثل لفعالية الأنزيم هو 5 في حين تراوح المدى الأمثل ليات الأنزيم بين 4-6.5 ،كما أظهر ثباتا حراريا بين20-50 °م لمدة 15 دقيقة، و كانت درجة الحرارة المثلى 50 م و التي احتفظ عندها الأنزيم بكامل فعاليته عند الحضن لمدة ساعة، كما بلغت قيمة طاقة التنقيط 6.19 كيلو سعرة مول في حين بلغت قيمة طاقة مسخ الأنزيم 52.31 كيلو سعرة مول، أما الوزن الجزيئي للأنزيم فبلغ 97.72 كيلود التون باستعمال تقنية الترحيل الكهربائي بينما بلغ 103.51 كيلو دالتزن عند استعمال تقنية ١ لترشيح الهلامي، لوحظ أن أيونات المنغنيز و الموديوم لها دور منشط في فعالية الأنزيم بينما انخفضت إضافة البوتاسيوم في الفعالية، كما لوحظ انخفاض الفعالية الأنزيمية عند كافة اليوريا وسكر الكال كزز و مع زيادة التركيز في حين حصلت زيادة طفيفة بوجود المركابنزايثانول أما مركب EDTA فلم يكن له تأثير في الفعالية، كما أن قيم ثابت ميكالس Km و السرعة القصوى vmax للإبزيم كانتا 1.435 ملي مولاري ل1040.23 وحدة مل على التوالي عند استعمال ONPG، تم الكشف عن نواتج تحلل سكر الكلوكوز بوساطة تقنية الطبقة الرقيقة ILC إذ ظهر كل من الكلوكوز و الكالاكتوز .