تنقية انزيم اللاكتوبيروكسيديز و دراسة صفاته الجزئية

Abstract AR

تم فصل و تركيز و تنقية انزيم اللاكتوبيروكسيديز (LPO) في شرش حليب الأبقار باستخدام طريقة الترسيب بملح الأمونيوم للحصول على انزيم (LPO) المنقى جزئيا.

أو الإنزيم الخام (Crude LPO) تلتها عملية الديلزة و التنقية النهائية بواسطة كروماتوغرافية الألفة المعدنية (Immobilized metal affinity chromatography) للحصول على إنزيم (LPO) النقي من خلال ادمصاص الإنزيم بصورة انتخابية في هذا العمود.

و وجد أن الفعالية النوعية تزداد خلال مراحل التنقية، و قد تم التأكد من نقاوة الإنزيم بطريقة الترحيل الكهربائي في هلام متعدد الكريلامايد بوجود SDS فطهرت حزمة بروتينية (Single band) مما يدل على النقاوة العالية للإنزيم.

أظهرت نتائج توصيف الإنزيم أن وزنه الجزيئي 79600 دالتون بطريقة الترحيل الكهربائي، كما تم تقدير نقطة التعادل الكهربائية للإنزيم (Pi) بطريقة التبئير الكهربائي (Iso electro Focusing) و كانت مساوية إلى 8.8.

أظهرت الدراسة أن الإنزيم من البروتينات السكرية (Glycoprotein) و أن نسبة الجزء الكاربوهيدراتي فيه يشكل 8.4 %، أما الرقم الهيدروجيني الأمثل لفعالية الإنزيم النقي تجاه الكوايكول كمادة تفاعل (Substrate) فكان 6.0 في حين تراوح الرقم الهيدروجيني الأمثل لثبات الإنزيم بين (5-7).

لوحظ أن طاقة التنشيط لفعالية الإنزيم كانت بواقع (3.64 كيلو سعرة / مول) و طاقة التنشيط لمسخ الإنزيم (62.11 كيلو سعرة / مول) و كان الثبات الحراري للإنزيم عند 35 م.

أظهرت دراسة الثوابت الحركية أن معدلات قيم ثابت ميكاليس لتفاعل الأنزيم تجاه الكوايكول هي (1.84 ملغم / مل)، و أن معدل الثابت الحفزي (Kcat) تجاه مادة التفاعل نفسها هي (166.9) لكل دقيقة و السرعة القصوى (Vmax) (103.5 مايكرومول / دقيقة).