Pcr amplification of rapidly extracted dna from different pathogenic yeasts

الملخص AR

الطريقة الحالية لاستخلاص الحمض النووي DNA من الخمائر و غيرها من الفطريات المختلفة تستغر فاستهلاك للوقت و تتطلب مواد كيميائية سامة و سرطانية.

علاوة على ذلك, صعوبة عزل الحمض النووي DNA من الخمائر نتيجة وجود الجدار الخلوي أو الكبسولة المقاومة للتحليل.

تستعرض هذه الدراسة سريعة و جديدة لعزل ال DNA باستخدام السرعة العالية (HSCD) High speed cell disruption و مواد أخرى مختلفة مثل Chaotropic reagents في هدم الخلايا و ذلك بالمقارنة بطريقة (PC extraction) Cholorlform – phenol و ذلك باستخدام أربعة أجناس مختلفة من الخمائر ذات الأهمية الطبية و هم : Saccharomyces cerevisie, Candida utilis, Cryptococcus neoformens and Trichosporon beigelii.

لقد تم استخدام عزل مستعمرات مختلفة بمعدلين هما 107, 108 CFU و ذلك للمقارنة من حيث الاستخلاص.

إن الاستخلاص الكامل للأربع عينات قد تم خلال ساعة باستخدام HSCD extraction مقرنة للستة ساعات مستخدما طريقة (PC – extraction).

و لقد أظهرت نتائج طريقة HSCD أهمية كبيرة في معدل النمو و الاستخلاص إحصائيا عند CFU 108 و ذلك لكل من Candida utitlis, and Trichosporon beigelii عند (P < 0.05) و عند CFU 107 لكل من Cryptococcus neoformens, S.

cerevisia عند (P < 0.05).

و كانت بنفس المعدل لل CFU 105 ل CFU Neoformens 107 ل C.

utitlis و ذلك باستخدام HSCD & PC – extractionز و بالنسبة لل T.

beigelii عند CFU 107 وجد أن PC – extraction نتج في معدل عالي بالنسبة لطريقة HSCD extraction و ذلك مقارنة ب PC – extraction و لقد استنتج أن الإنتاج الأعلى الذي حصل عليه عند CFU 107, 108 كان ذات أهمية باستخدام طريقة HSCD extraction و ذلك مقارنة ب PC – extraction و قد استنتج من هذه الدراسة أن طريقة الاستخلاص السريع لل DNA كانت عالية و قد تم التعرف على هذه النتائج باستخدام Polymerase chain reaction (PCR) لعمل DNA amplification و كذلك باستخدام Restriction fragment Polymorphism (RFLP) و خلاصة يمكن الاستنتاج أن الهدم الميكانيكي لخلايا الخميرة بواسطة HSCD – extraction كائن أسرع و أكثر أمنا و كفاءة لاستخلاص الحمض النووي DNA من الخمائر ذات الأهمية الطبية.