Evaluation of conventional PCR assay in comparison to real-time PCR assay for detection of bovine herpesvirus-1 in bovine semen and seminal plasma
Other Title(s)
تقييم إختبار تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدي مقارنة بإختبار تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي للكشف عن فيروس الهربس البقري-1 في كل من السائل المنوي و بلازما السائل المنوي البقري
Joint Authors
Darwish, Samah Fikri
Amin, Adil Sayyid
Source
Assiut Veterinary Medical Journal
Issue
Vol. 57, Issue 128 (31 Jan. 2011), pp.285-299, 15 p.
Publisher
Assiut University Faculty of Veterinary Medicine
Publication Date
2011-01-31
Country of Publication
Egypt
No. of Pages
15
Main Subjects
Topics
Abstract AR
الهدف من هذه الدراسة هو تقييم حساسية اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدي مقارنة باختبار تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الكشف عن فيروس الهربس البقري -1 في كل من السائل المنوي و بلازما السائل المنوي للأبقار.
تم عمل تخفيفات من عشرة أضعاف أضعاف (ten folder dilutions) من الفيروس في مل من ميديا الـ MEM و السائل المنوي البقري السلبي للفيروس.
تبدأ التخفيفات من تركيز 10 7 - 10 -4 (10-4 – 107 TCID50) و ذلك للكشف عن الحد الأدنى من الفيروس و اللازم لكل من الاختبارين، تم استخلاص الحمض النووي الديوكس ريبوزي من كل من ميديا الـ MEM و السائل المنوي المعديان بالفيروس كما تم أيضا استخلاص الحمض النووي الديوكس ريبوزي من بلازما السائل المنوي المأخوذة من السائل المنوي المعدي بالفيروس معمليا.
و قد وجد أن حساسية اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي في الكشف عن الحمض النووي المستخلص من تخفيفات الفيروس في كل من ميديا الـ MEM و السائل المنوي هما 10-1 TCID50 / ml و 102 TCID50 / ml على الترتيب.
بينما الحساسية تصل إلى 1 TCID50 / ml عند استخدام الحمض النووي من بلازما السائل المنوي المعدي بالفيروس.
أما بالنسبة لاختبار تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدي فقد كانت الحساسية هي1 TCID50 / ml في كل من ميديا الـ MEM و السائل المنوي المعدي بالفيروس بينما كانت الحساسية 10 TCID50 / ml عند استخدام بلازما السائل المنوي.
خلصت هذه الدراسة إلى أن اختبار تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدي الذي تم تقييمه في هذه الدراسة يعطي نتائج مرضية و مقبولة للكشف عم فيروس الهربس البقري -1 في السائل المنوي للأبقار مقارنة باختبار تفاعل البلمرة المتسلسل الكمي المقيم في نفس الدراسة و اختبارات تفاعل البلمرة المتسلسل التقليدية المسجلة في البحوث الأخرى.
و قد وجد أن استخدام بلازما السائل المنوي بدلا من السائل المنوي الكامل يمكن أن يكون بديلا أفضل يزيد من حساسية الاختبار.
Abstract EN
The aim of this study was to evaluate the sensitivity of conventional Polymerase Chain Reaction (PCR) assay in comparison to real time PCR assays for detection of BoHV-1 in bovine semen and seminal plasma.
Tenfold serial dilutions of BoHV-1 strain were prepared in one ml aliquots of both minimal essential medium (MEM) and negative bovine semen.
The dilutions started from 10710 10"4 to detect detection limits of both PCR and real time PCR assays.
Detection limits of real time PCR assay were 10"1 TCID50/ml and 102 TCID50/ml when PCR performed on viral DNA extracted from tenfold dilutions of BoHV-1 in MEM and artificially spiked semen, respectively.
When seminal plasma of the same dilutions of spiked semen was used for DNA extraction, the PCR detection limit became 1 TCID50/ ml.
Considering conventional PCR, detection limits were 1 TCID50/ml when PCR performed on viral DNA extracted from tenfold dilutions of BoHV-1 in MEM and artificially spiked semen as shown by the presence of a DNA band of the expected size on ethidium bromide-stained agarose gels, respectively.
On the other hand, the PCR detection limit was 10 TCID50/ ml when seminal plasma of the same dilutions of spiked semen was used.
In conclusion, conventional PCR assay performed in this study provide a satisfactory results for detection of BoHV-1 in bovine semen in comparison to real time PCR and other reported PCR assays.
Moreover, the use of seminal plasma instead of whole semen can be better alternative increasing the sensitivity of detection.
American Psychological Association (APA)
Darwish, Samah Fikri& Amin, Adil Sayyid. 2011. Evaluation of conventional PCR assay in comparison to real-time PCR assay for detection of bovine herpesvirus-1 in bovine semen and seminal plasma. Assiut Veterinary Medical Journal،Vol. 57, no. 128, pp.285-299.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-256972
Modern Language Association (MLA)
Darwish, Samah Fikri& Amin, Adil Sayyid. Evaluation of conventional PCR assay in comparison to real-time PCR assay for detection of bovine herpesvirus-1 in bovine semen and seminal plasma. Assiut Veterinary Medical Journal Vol. 57, no. 128 (Jan. 2011), pp.285-299.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-256972
American Medical Association (AMA)
Darwish, Samah Fikri& Amin, Adil Sayyid. Evaluation of conventional PCR assay in comparison to real-time PCR assay for detection of bovine herpesvirus-1 in bovine semen and seminal plasma. Assiut Veterinary Medical Journal. 2011. Vol. 57, no. 128, pp.285-299.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-256972
Data Type
Journal Articles
Language
English
Notes
Includes bibliographical references : p. 298-299
Record ID
BIM-256972
