Expression of recombinant escherichia coli l-asparaginase II, purification and characterization
Other Title(s)
انتاج إنزيم الأسبراجينيز 2-النعبر عنه في بكتيريا القولون، تنقية و دراسة خواصه
Joint Authors
Maharem, Tahany Mahmud
Sabri, Gilane Muhammad
Muhammad, Muhammad Raja
Muhammad, Manal Asim Imam
Source
The Egyptian Journal of Biochemistry and Molecular Biology
Issue
Vol. 29, Issue 2 (31 Dec. 2011), pp.237-256, 20 p.
Publisher
Egyptian Society of Biochemistry and Molecular Biology
Publication Date
2011-12-31
Country of Publication
Egypt
No. of Pages
20
Main Subjects
Abstract AR
يلعب الأسبراجينيز دورا هاما في الحفاظ على الاتزان النيتروجيني و مستوى الأحماض الأمينية داخل الخلايا الطبيعية حيث إنه يحول الأسبراجين إلى حمض أسبارتك و نشادر كما أنه يعتبر دواء فعالا في علاج سرطان الدم حيث أنه يؤدي إلى اختفاء أسبراجين الدم فتحرم خلايا السرطان من هذا الحامض الأميني الأساسي و التي تعد عاجزة بدورها على تكوينه مما يترتب على ذلك هلاكها حيث تصبح غير قادرة على بناء البروتينات اللازمة لخلاياها.
شملت الدراسة تحضير إنزيم الأسبراجينيز المهجن من بكتريا القولون باستخدام تفاعل البلمرة المتسلسل، تفاعلات القطع المزدوج و اللصق لجين الأسبراجينيز و الناقل البلازميدي المعبر و إنتاج بروتين أسبراجينيز -2 داخل بكتريا القولون ثم فصله و تنقيته باستخدام عمود جلوتاثيون سيفاروز.
و قد تم دراسة بعض الخصائص الكيميائية الحيوية لإنزيم الأسبراجينيز مثل الوزن الجزيئي 152 كيلو دالتون، نقطة التعادل الكهرب 5,1، ثابت ميكائيل 12,5 ميكرومول للإنزيم، ثابت التحفيز 1×210 ثانية-1، و ثابت الاختصاص 0,8 × 610، مول-1 ثانية-1.
Abstract EN
-L-Asparaginase (ASNase) is an anti-cancer ("antineoplastic" or "cytotoxic") chemotherapy drug that is used for the treatment of acute lymphoblastic leukemia (ALL).
An efficient and economical scheme was developed for over expression and rapid purification of the Escherichia coli enzyme.
The gene encoding for the Escherichia coli L-asparaginase were PCR-amplified and cloned in pGEX-4Tl expression vector.
The recombinant L-asparaginase was purified to homogeneity by affinity chromatography on glutathione Sepharose column.
The recombinant enzyme had an apparent MW of 152 kDa and a Km value of 12.5 |iM for the main physiological substrate L-asparagine.
The p / value was 5.6 while the turnover number (catalytic constant) was 1 x 102 s"1 and the Kca / Km value (specificity constant) was 0.8 x 107 M'V1.
American Psychological Association (APA)
Maharem, Tahany Mahmud& Sabri, Gilane Muhammad& Muhammad, Muhammad Raja& Muhammad, Manal Asim Imam. 2011. Expression of recombinant escherichia coli l-asparaginase II, purification and characterization. The Egyptian Journal of Biochemistry and Molecular Biology،Vol. 29, no. 2, pp.237-256.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-279298
Modern Language Association (MLA)
Maharem, Tahany Mahmud…[et al.]. Expression of recombinant escherichia coli l-asparaginase II, purification and characterization. The Egyptian Journal of Biochemistry and Molecular Biology Vol. 29, no. 2 (Dec. 2011), pp.237-256.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-279298
American Medical Association (AMA)
Maharem, Tahany Mahmud& Sabri, Gilane Muhammad& Muhammad, Muhammad Raja& Muhammad, Manal Asim Imam. Expression of recombinant escherichia coli l-asparaginase II, purification and characterization. The Egyptian Journal of Biochemistry and Molecular Biology. 2011. Vol. 29, no. 2, pp.237-256.
https://search.emarefa.net/detail/BIM-279298
Data Type
Journal Articles
Language
English
Notes
Includes bibliographical references : p. 252-256
Record ID
BIM-279298
