تنقية أنزيم البروتييز جزئيا من أوراق نبات الخس الشوكي (Lactuca serriola L.)‎ و تحديد بعض صفاته و إستعماله في بعض التطبيقات العملية

Abstract AR

استعمل مسحوق الأسيتون لتحضير مستخلص أنزيم البروتييز من أوراق نبات الخس الشوكي Prickly lettuce Lactuca serriola L.

و جرى تركيز الأنزيم باستعمال ملح كبريتات الأمونيوم بنسب إشباع مقدارها 80-40 % تلاها تنقية الأنزيم جزئيا باستعمال الترشيح الهلامي بمادة Sephacryl S-200 للحصول على الأنزيم بفعالية نوعية 51.37 وحدة / ملغم و عدد مرات تنقية 6.30 مرة و حصيلة مقدارها 77.55 % و بلغ الوزن الجزيئي للأنزيم المنقى 31000 دالتون عند تقديره بوساطة الترشيح الهلامي، و أظهرت النتائج أن الرقم الهيدروجيني الأمثل لفعالية الأنزيم المنقى التحللية باستعمال الكازئين كمادة أساس بلغ 8.5 بينما كان الأنزيم ثابتا في مدى واسع من قيم الأرقام الهيدروجينية تتراوح بين 4-10 و بلغت درجة الحرارة المثلى لفعالية الأنزيم 60 م و كان الأنزيم ثابتا بدرجة حرارة 55 م لمدة 30 دقيقة و بينت النتائج حصول زيادة في الفعالية الأنزيمية بوجود كلا من أيونات المغنيسيوم و الكالسيوم و الزنك و التي كانت 114.09 و 128.63 و %118.43 على التوالي في حين أدى وجود الكوبالت و الزئبق إلى خسارة ما يقارب 50 و 95 % من الفعالية الأنزيمية على التوالي.

كما لوحظ بأن الفعالية المتبقية لم تتأثر كثيرا عند استعمال كلا من phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) و Pepstatin و Ethylene Diamine Tetra Acetic acid (EDTA) التي كانت 94.37 و 96.27 و 91.93 % على التوالي و عند استعمال Iodoacetic acid لوحظ وجود تثبيط عالي إذ بلغت الفعالية المتبقية 22.76 % بينما كانت الفعالية المتبقية 10.537 % عند استعمال β-mercaptoethanol و ساهم التحوير الكيميائي للأنزيم المنقى باستعمال Polyethylene glycol (PEG) المنشط بمادة (CC) Cyanuric chloride في رفع درجة الفعالية المتبقية للأنزيم عند قيم الأس الهيدروجيني القاعدية و درجات الحرارة المرتفعة و بينت نتائج التطبيقات العملية إمكانية استعمال الأنزيم في إزالة الشعر من جلد البقر بشكل كامل بعد النقع لمدة 24 ساعة و عند استعمال الأنزيم مع مساحيق التنظيف التجارية لوحظ بأن الأنزيم غير المحور احتفظ ب 89 و 84 و 82 و 76 و 69 % من فعاليته الأصلية بينما احتفظ الأنزيم المحور بدرجة 72 % ب 94 و 86 و 85 و 79 و 74 % من فعاليته الأصلية عند حضنهما بدرجة حرارة 50 م لمدة 30 دقيقة مع كل من المنظفات Alwazir و Tide و Ariel و Bonux و Persil على التوالي.